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采用密度梯度離心法分離臍血干細(xì)胞

第一、利用 3 種質(zhì)量濃度的聚蔗糖泛影葡胺分離液分離臍血單個(gè)核細(xì)胞，用細(xì)胞計(jì)數(shù)法、活細(xì)胞染色法及流式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀分析單個(gè)核細(xì)胞的表面標(biāo)志，以探討密度梯度離心法分離人臍血干細(xì)胞分離介質(zhì)的最佳濃度，建立臨床級(jí)干細(xì)胞分離應(yīng)用方案，使用的離心機(jī)設(shè)備為冷凍低速離心機(jī)。

第二、臍血由于其來源容易，所含細(xì)胞種類和數(shù)量比較多，比骨髓和外周血中的細(xì)胞更為原始，且其臨床應(yīng)用不涉及社會(huì)、倫理、法律方面的限制等優(yōu)勢(shì)。臍血間充質(zhì)干細(xì)胞可以分化為成骨、軟骨、脂肪細(xì)胞等，內(nèi)皮干/祖細(xì)胞治療缺血性疾病，已經(jīng)在臨床有突出的療效。

國內(nèi)、外分離臍血干細(xì)胞方法常采用磁珠/流式細(xì)胞分選法、臍血庫儀器/羥乙基淀粉沉淀法和密度梯度離心法。由于目的不同，各類方法有其自身特點(diǎn)

第三、臍血庫分離干細(xì)胞常用羥乙基淀粉沉淀和儀器離心分離法，分離的細(xì)胞量大、成分較多但混有大量紅細(xì)胞，適合用作大量分離、儲(chǔ)存干細(xì)胞。密度梯度離心法多采用Percoll、Ficoll分離液分離細(xì)胞，得到單個(gè)核細(xì)胞群，該細(xì)胞群成分復(fù)雜，純度不高。但密度梯度離心法分離臍血單個(gè)核細(xì)胞由于細(xì)胞得率高、方法簡單等突出優(yōu)點(diǎn)，有望成為制備臨床級(jí)干細(xì)胞的優(yōu)選方法，分離介質(zhì)以聚蔗糖泛影葡胺最為常用。

第四、應(yīng)用臍血分離干細(xì)胞的目的是獲得以干細(xì)胞(間充質(zhì)干細(xì)胞、造血干細(xì)胞)為主要群體的單個(gè)核細(xì)胞群。用聚蔗糖泛影葡胺為分離介質(zhì)研究何種密度狀態(tài)下獲得的干細(xì)胞最多，目前尚未深入研究。文章在前期工作基礎(chǔ)上，探索密度梯度離心法用3種不同質(zhì)量濃度分離液分離臍血單個(gè)核細(xì)胞，比較分離單個(gè)核細(xì)胞不同亞群的比例和純度，試圖找出用密度梯度離心法獲得干細(xì)胞比例和純度較高的分離介質(zhì)。