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臺(tái)式離心機(jī)的分離方法
臺(tái)式離心機(jī)的分離方法之差速離心
差速離心方法即是逐次增加離心力,每次可沉降樣品溶液中的一些組份。
臺(tái)式離心機(jī)的差速離心是一種最常用的方法。在這種方法中,離心管在開(kāi)始時(shí)裝滿了均一的樣品溶液。通過(guò)在特定速度下規(guī)定時(shí)間內(nèi)離心后,就可得到兩個(gè)部份:沉淀和上清液。
通常在第一次離心時(shí)把大部分不需要的大粒子沉降去掉。這時(shí)所需的組份大部分仍留在上清液中。然后將收集到的上清液以更高速度離心,把所需的粒子沉積下來(lái)。離心的時(shí)間要選擇得當(dāng),使大部份不需要的更小的粒子仍留在上清液中。得到的沉淀和上清液可以進(jìn)行進(jìn)一步的離心,直到達(dá)到所需要的分離純度為止。
臺(tái)式離心機(jī)的分離方法差速離心的特點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單,起缺點(diǎn)就是分離純度不高。
臺(tái)式離心機(jī)的分離方法密度梯度離心法
密度梯度離心法可以同時(shí)使樣品中幾個(gè)或全部組份分離,具有很好的分辨率。
1)速率區(qū)帶法(rate zonal):
根據(jù)樣品中不同粒子所具有的不同的尺寸大小及沉降速度(S)。大致步驟如下:
在臺(tái)式離心機(jī)的離心管中裝入密度梯度溶液,溶液的密度從離心管頂部至底部逐漸增加(正梯度)。
將所需分離的樣品小心地加至密度梯度溶液的頂部。樣品在梯度溶液表面形成一負(fù)梯度。
由于不同大小的粒子在離心力作用下,在梯度中移動(dòng)的速度不一樣,所以經(jīng)過(guò)離心后會(huì)形成幾條分開(kāi)的樣品區(qū)帶。
注意:樣品粒子的密度必須大于梯度液注中任一點(diǎn)的密度。離心過(guò)程必須在區(qū)帶到達(dá)管子底部前停止。
2)等密度離心法(isopycnic):
根據(jù)粒子的不同密度來(lái)分離。離心過(guò)程中,粒子會(huì)移至與它本身密度相同的地方形成區(qū)帶。
密度樣度的選擇要使梯度的范圍包括所有待分離粒子的密度。樣品可以在密度梯度液粒上面或均勻分布在密度梯度中。經(jīng)離心后,樣品粒子達(dá)到它們的平衡點(diǎn)。
注意:平衡后粒子的分離完全由其密度決定,與時(shí)間無(wú)關(guān),此時(shí)再改變臺(tái)式離心機(jī)的離心轉(zhuǎn)速,只能改變區(qū)帶的相對(duì)位置。
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